產品介紹
細胞名稱：Cas9穩(wěn)定表達的人肺癌細胞
形態(tài)特性：上皮樣；多角形
生長特性：貼壁生長
特征特性：該細胞是采用慢病毒感染的方式使A549細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術編輯基因組DNA。
培養(yǎng)條件： McCoy＇s 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法： 1:3~1：8傳代；每周2~3次。
傳代情況： C3
凍存條件：基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
產品名稱 | Cas9穩(wěn)定表達的人肺癌細胞 |
英文簡稱 | A549-Cas9-538 |
狀態(tài) | 貼壁 |
細胞冷凍保存：
1.凍存液：92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據實驗室條件自行選擇）
2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。
細胞培養(yǎng)的操作步驟：
1.Cas9穩(wěn)定表達的人肺癌細胞吸走用于培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞；
2.吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；
（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài)，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞完全漂浮。混勻細胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
3.加入6-8ml完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；
4.將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；
傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代。
