人正常肝細胞；L-02細胞凍存操作

人正常肝細胞；L-02細胞凍存操作:

凍存液配方: 無血清凍存液,液氮儲存

細胞密度 :待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例

凍存方法: a、收集細胞及細胞培養液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加1 mL血清重懸細胞,進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項 :凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案

收到后處理:

細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無菌操作,培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中,加入6ml完全培養基,放入37℃、5%CO2孵箱培養;超過80%匯合度時,根據情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養步驟。(注意發貨的是密封培養瓶的話,放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養基,另外一瓶用自己配的完全培養基)