免疫共沉淀(CoIP)是研究蛋白質相互作用的經典方法

　　免疫共沉淀(CoIP)是研究蛋白質相互作用的經典方法，其基于抗體和蛋白的特異性親和作用，通過捕獲與蛋白或抗原特異性結合的抗體，進而從復雜的樣品中捕獲及富集目標蛋白，同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子。

免疫沉淀(IP)則主要是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。

免疫（共）沉淀（IP/CoIP）主要實驗流程見上圖：

（1）轉染表達目的蛋白的質粒后，后續主要是轉染表達目的蛋白的質粒（2）對樣本的裂解處理，（3）蛋白和抗體、珠子的孵育，（4）免疫復合物沉淀洗滌之后，（5）再進行后續分析，常規是做WB，也有用質譜分析的。

可以看出，CoIP本身的實驗流程并不復雜，只是為了拿到靠譜又漂亮的結果、需要我們不斷優化實驗條件，包括裂解液的選擇、抗體的選擇、Protein A與G的選擇和使用量、beads的選擇等。

小編收集了以下常見的免疫（共）沉淀需注意點：

1.   細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內存在的蛋白質－蛋白質相互作用，多采用非離子變性劑（NP40 或Triton X-100)。每種細胞的裂解

      條件是不同的，需要通過經驗和試驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2％SDS)，細胞裂解液中要加各種酶抑制劑。

2.   免疫（共）沉淀最需要注意點就是抗體的性質?？贵w不同、其和抗原的結合能力也不同，WB、IHC能結合未必能用在IP反應。建議仔細檢查抗體的

     說明書。特別是多抗的特異性是問題。

3.   需充分考慮抗體/緩沖液的比例。抗體過少則不能檢出抗原，過多則不能沉降在beads上，殘存在上清。緩沖劑太少則不能溶解抗原，過多則抗原

     被稀釋。

4.   如果拿到免疫復合物后用WB檢驗，必須在實驗前預測目的蛋白是什么，以選擇最后檢測的抗體，若預測不正確，實驗就得不到結果，實驗本身具有

     冒險性。