免疫共沉淀(CoIP)是研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法

　　免疫共沉淀(CoIP)是研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，其基于抗體和蛋白的特異性親和作用，通過捕獲與蛋白或抗原特異性結(jié)合的抗體，進(jìn)而從復(fù)雜的樣品中捕獲及富集目標(biāo)蛋白，同時(shí)可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子。

免疫沉淀(IP)則主要是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法。

免疫（共）沉淀（IP/CoIP）主要實(shí)驗(yàn)流程見上圖：

（1）轉(zhuǎn)染表達(dá)目的蛋白的質(zhì)粒后，后續(xù)主要是轉(zhuǎn)染表達(dá)目的蛋白的質(zhì)粒（2）對樣本的裂解處理，（3）蛋白和抗體、珠子的孵育，（4）免疫復(fù)合物沉淀洗滌之后，（5）再進(jìn)行后續(xù)分析，常規(guī)是做WB，也有用質(zhì)譜分析的。

可以看出，CoIP本身的實(shí)驗(yàn)流程并不復(fù)雜，只是為了拿到靠譜又漂亮的結(jié)果、需要我們不斷優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，包括裂解液的選擇、抗體的選擇、Protein A與G的選擇和使用量、beads的選擇等。

小編收集了以下常見的免疫（共）沉淀需注意點(diǎn)：

1.   細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP40 或Triton X-100)。每種細(xì)胞的裂解

      條件是不同的，需要通過經(jīng)驗(yàn)和試驗(yàn)確定。不能用高濃度的變性劑（0.2％SDS)，細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑。

2.   免疫（共）沉淀最需要注意點(diǎn)就是抗體的性質(zhì)?？贵w不同、其和抗原的結(jié)合能力也不同，WB、IHC能結(jié)合未必能用在IP反應(yīng)。建議仔細(xì)檢查抗體的

     說明書。特別是多抗的特異性是問題。

3.   需充分考慮抗體/緩沖液的比例?？贵w過少則不能檢出抗原，過多則不能沉降在beads上，殘存在上清。緩沖劑太少則不能溶解抗原，過多則抗原

     被稀釋。

4.   如果拿到免疫復(fù)合物后用WB檢驗(yàn)，必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測目的蛋白是什么，以選擇最后檢測的抗體，若預(yù)測不正確，實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果，實(shí)驗(yàn)本身具有

     冒險(xiǎn)性。