豬腸道杯狀病毒RT-LAMP試劑盒反應(yīng)五要素

豬腸道杯狀病毒RT-LAMP試劑盒反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。

設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3’端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3’端的堿基，特別是zui末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)，被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn)，這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

紅細(xì)胞生成素(EPO)重組蛋白

紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)重組蛋白

花生四烯酸-15-脂加氧酶(ALOX15)重組蛋白

滑行蛋白α(TXLNα)重組蛋白

踝蛋白(TLN)重組蛋白

環(huán)加氧酶1(PTGS1)重組蛋白

環(huán)腺苷二磷酸核糖水解酶(cADPRH)重組蛋白

環(huán)氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白

回腸脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP6)重組蛋白

饑餓素-O-乙酰基轉(zhuǎn)移酶(GOAT)重組蛋白

肌紅蛋白(MYO)重組蛋白

肌肌酸激酶(CKM)重組蛋白

肌球蛋白輕鏈1(MYL1)重組蛋白

肌球蛋白輕鏈2(MYL2)重組蛋白

肌球蛋白輕鏈激酶(MYLK)重組蛋白

肌球蛋白重鏈1(MYH1)重組蛋白

肌球蛋白重鏈2(MYH2)重組蛋白

肌細(xì)胞生成素(MYOG)重組蛋白

肌原纖蛋白1(FBN1)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP12)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶15(MMP15)重組蛋白