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鳩寧病毒PCR檢測試劑盒反應五要素

發(fā)表時間:2021-03-18 14:12

鳩寧病毒PCR檢測試劑盒反應五要素:

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

人異質性胞核核糖核蛋白A3(hnRNP A3)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A3,hnRNP A3 ELISA Kit

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人異質性胞核核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1 ELISA Kit

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人異質性胞核核糖核蛋白A1(hnRNP A1)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1,hnRNP A1 ELISA Kit

人異質性胞核核糖核蛋白A1(hnRNP A1)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1,hnRNP A1 ELISA Kit

人異質性胞核核糖核蛋白A0(hnRNP A0)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A0,hnRNP A0 ELISA Kit

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人異質型核糖核蛋白復合物/抗RA33抗體(hnRNP/RA33)ELISA試劑盒Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein compies/anti-RA33-antibody,hnRNP/RA33 ELISA Kit

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人異質核糖核蛋白Q(SYNCRIP/HNRPQ/NSAP1)ELISA試劑盒Human SYNCRIP/HNRPQ/NSAP1 ELISA kit

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