常用免疫組織化學方法的原理

常用免疫組織化學方法的原理：

1. 免疫熒光細胞化學技術：將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量。

2. 免疫酶細胞化學技術：是目前免疫組織化學研究中zui常用的技術．基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究。

3. 免疫膠體金技術：就是用膠體金標記一抗，二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究。

抗體修復方式:

修復液：0.01M 枸櫞酸（pH6.0）或者0.05M EDTA（pH8.0）

抗體修復方法：

方法1：沸水浴修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于沸水浴環(huán)境，保持外部沸騰狀態(tài)15min，自然冷卻至室溫；

方法2：微波修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于微波爐中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷卻至室溫。

抗體溶解方法：方法1：我們的抗體（凍干粉）已經(jīng)包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐劑（疊氮鈉或慶大霉素），您只需要加入滅菌的雙蒸水就行了。抗體溶解后，置于-20℃保存，可以分裝后使用，避免反復凍融，可保證至少1年有效；

方法2：也可以只加入一半體積的雙蒸水，再用一半體積的甘油補足，置于-20℃保存，這樣抗體不會凍，有利于抗體的穩(wěn)定。

后續(xù)試驗時，再使用對應的緩沖液稀釋成工作液，即用即配。